實(shí)驗室常用離心機介紹
轉子:角式與水平式轉子,角式常用于沉降離心,水平式還常用于梯度離心。
離心原理:利用轉子高速旋轉時(shí)所產(chǎn)生的強大離心力,加速顆粒的沉淀速度,把樣品中不同沉降系數或浮力密度的物質(zhì)分離開(kāi)。
實(shí)驗室常用離心機離心方法:
(1)差速離心法:定義,應用于沉降系數相差一~幾個(gè)數量級顆粒的分離。
缺點(diǎn):a.分離效果差,不能一次得到純顆粒,經(jīng)再懸浮和再離心(2~3次),才能得到較純的顆粒。
b.壁效應嚴重,在離心管一側會(huì )出現沉淀。
c.顆粒被擠壓,可能變形,聚集而失活。
?。?)梯度離心:定義,應用于相差較少(20%或更少)或分子量相差三倍的蛋白質(zhì)。
優(yōu)點(diǎn):a.分離效果好,可一次獲得較純顆粒。
b.適應范圍廣,能象差速離心法一樣分離具有沉降系數差的顆粒,又能分離有一定浮力密度差的顆粒。
c.顆粒不會(huì )擠壓變形。
缺點(diǎn):離心時(shí)間較長(cháng);需要制備梯度;操作嚴格,不易掌握。
常用的密度梯度離心方法有:蔗糖密度梯度離心;氯化銫等密度梯度離心。
實(shí)驗室常用離心機使用時(shí)應注意事項:
(1).離心機要置水平位置,以保證旋轉軸垂直地球水平面。
(2).使用前應檢查套環(huán)是否平衡(臺稱(chēng))。
(3).離心杯及其外套(離心管套)是否平衡(臺稱(chēng))。
(4).樣品傾入離心杯后應與離心管套一起兩兩平衡,平衡后把它們放置于轉子的對稱(chēng)位置。
(5).蓋好蓋子,打開(kāi)電源開(kāi)關(guān),調整離心時(shí)間。
(6).啟動(dòng)離心時(shí)轉速應由小至大,緩慢升速(一般要2~3min)。
(7).達到預定轉速后再調整離心時(shí)間至預定時(shí)間(10min)。
(8).離心完成后要調整調速連桿至零位,同時(shí)關(guān)上電源。
(9).要等到轉速為零時(shí)才能打開(kāi)離心機蓋,取出樣品。